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液体クロマトグラフィー質量分析、それは何ですか、どのように機能し、なぜ有用なのですか? そのため、過去に、MALDI-TOF などの質量分析に関連するいくつかの技術に加えて、さまざまなクロマトグラフィー、ビデオの最後にリンクされているプレイリストについてかなり話してきました。 現在、液体クロマトグラフィー (LC) は、他の分子への親和性に基づいてサンプル内の化合物を分離するために使用される手法であり、さらなる分析のために質量分析 (MS) と組み合わせることができます。 つまり、これら 2 つの異なる技術の融合です。 クロマトグラフ分離後、化合物は気相に脱溶媒和され、イオン化源でイオン化され、質量分析のために質量分析計に導入されます。 液体クロマトグラフィーは、特にタンパク質や複雑なペプチドなどの大きな非揮発性分子の優れた分離技術です。 これを質量分析と組み合わせると、さまざまなタイプのカラムケミストリーを使用して幅広いサンプルをカバーできるため、特に便利です。 実際、液体クロマトグラフィーは非常に効率的であるため、分子分離のためのゲル電気泳動に大きく取って代わりました。 LC は、MS に必要な完全なイオン化を妨げるイオン抑制を低減するため、MS との組み合わせにも特に適しています。 高速液体クロマトグラフィーと呼ばれる LC の改良版も存在し、通常の液体クロマトグラフィーの大部分に取って代わりました。 LC の 4 つの主なタイプは、パーティション クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびアフィニティー クロマトグラフィーです。これら 4 つのクロマトグラフィーはすべて、このビデオの最後にリンクされている私のタンパク質精製プレイリストで見つけることができます。 また、これまでのビデオが役に立ったと感じた場合は、すぐに「いいね！」をしてください。 簡単に言うと、LC ワークフローは次のように実行されます。 カラムには、移動相と固定相が含まれています。 サイズ、電荷、疎水性のレベルなど、これらの化合物の品質の独自の違いに基づいて、サンプル内の化合物を分離します。 移動相がカラムから流出すると、屈折率や光吸収などの特定の物理的または化学的特性を「登録」する検出器を通過します。 これは、サンプル中の成分の量に対応するシグナルまたは「ピーク」として表示されます。 分析物が検出される時間はその RT と呼ばれ、サンプルの化合物は、RT を既知の RT と比較することで確認できます。 ただし、これはあまり信頼できるものではなく、二次的な確認が必要です。 これで、サンプルは質量分析計に移動できます。 LC と MS は、インターフェイスを介して結合されます。 熱を加えると、分析対象分子が気化してイオン化されます。 MS は気相イオンしか測定できないため、これは非常に重要です。 エレクトロスプレーイオン化 (ESI) と大気圧化学イオン化 (APCI) は、LC-MS 分析で最も一般的に使用される 2 つのイオン化方法です。 次に、検体イオンは質量分析計に引き込まれ、電場および/または磁場にさらされます。 適用されるフィールドを変化させることにより、質量対電荷 (m/z) 値に基づいて別のフィールドから確実に分離されます。 分離後、イオンはさまざまな質量検出器で収集および検出できますが、最も一般的なのは電子増倍管です。 LC-MS によるサンプルの分析中に測定されたイオンの存在量は、トータル イオン クロマトグラム (TIC) としてプロットされます。 プロットには、RT に対する分析対象イオンのピーク強度が表示されます。 クロマトグラムのポイントは、測定された m/z 値に対するイオン存在量を示す質量スペクトルに関連付けられています。

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